一、概述:
在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)磷酸化是一種重要的翻譯后修飾,由特定位點(diǎn)的蛋白質(zhì)激酶催化把磷酸基團(tuán)從一個(gè)化合物轉(zhuǎn)移到另一個(gè)化合物上的過(guò)程。調(diào)控著細(xì)胞的基本進(jìn)程,如細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等。質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)的磷酸化位點(diǎn)是利用蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)胰蛋白酶消化后,純化出磷酸化多肽,質(zhì)譜鑒定出磷酸化位點(diǎn)。
二、技術(shù)優(yōu)勢(shì):與傳統(tǒng)的western鑒定磷酸化相比,通過(guò)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)的磷酸化位點(diǎn)可以定位到氨基酸。
三、技術(shù)服務(wù)流程:
1、質(zhì)譜鑒定(蛋白鑒定)樣品的制備:利用磷酸化抗體免疫共沉淀沉淀出磷酸化蛋白質(zhì)、IMAC純化磷酸化蛋白質(zhì)、表達(dá)和純化磷酸化蛋白質(zhì)和放射性同位素標(biāo)記磷酸化蛋白;
2、蛋白質(zhì)的分離:純化后的磷酸化蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)凝膠電泳分離后,割取磷酸化蛋白質(zhì)條帶用胰蛋白酶酶切;
3、質(zhì)譜鑒定(蛋白鑒定)的鑒定:質(zhì)譜鑒定磷酸化位點(diǎn);
4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。
四、服務(wù)內(nèi)容:
1、質(zhì)譜鑒定(蛋白鑒定)的分離、純化、割取和酶切;
2、質(zhì)譜分析;數(shù)據(jù)庫(kù)檢索;
3、提交質(zhì)譜鑒定(蛋白鑒定)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。